分子熒光分光光度計

  分子熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數，從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過(guò)對這些參數的測定， 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構象變化， 從而闡明分子結構與功能之間的關(guān)系。

分子熒光分光光度計基本原理
   由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過(guò)濾過(guò)和反射后，被光電倍增管所接受，然后以圖或數字的形式顯示出來(lái)。
   物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩定的,在返回基態(tài)的過(guò)程中將一部分的能量又以光的形式放出，從而產(chǎn)生熒光．
   不同物質(zhì)由于分子結構的不同,其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜；，因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來(lái)定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定。
   在溶液中，當熒光物質(zhì)的濃度較低時(shí),其熒光強度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系,即IF=KC,利用這種關(guān)系可以進(jìn)行熒光物質(zhì)的定量分析,與紫外-可見(jiàn)分光光度法類(lèi)似，熒光分析通常也采用標準曲線(xiàn)法進(jìn)行。

分子熒光分光光度計構成
1. 光源：
為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈，后者能發(fā)射出強度較大的連續光譜，且在300nm～400nm 范圍內強度幾乎相等，故較常用。
2．激發(fā)單色器：
置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或*單色器，篩選出特定的激發(fā)光譜。
3．發(fā)射單色器：
置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器，常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。
4． 樣品室：
通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時(shí)，光源與檢測器成直角安排；測量固體時(shí)，光源與檢測器成銳角安排。
5． 檢測器：
一般用光電管或光電倍增管作檢測器?？蓪⒐庑盘柗糯蟛⑥D為電信號。

分子熒光分光光度計功能特點(diǎn)
1． 熒光發(fā)射光譜
選擇某一固定波長(cháng)的光激發(fā)樣品，記錄樣品中產(chǎn)生的熒光發(fā)射強度與發(fā)射波長(cháng)間的函數關(guān)系，即得熒光發(fā)射光譜。
2． 熒光激發(fā)光譜
選定某一熒光發(fā)射波長(cháng)記錄熒光發(fā)射強度作為激發(fā)光波長(cháng)的函數，即得熒光激發(fā)光譜。
3．時(shí)間分辨技術(shù)；
可用于對混合物中光譜重疊但有壽命差異的組分進(jìn)行分辨并分別測量。
時(shí)間分辨熒光測定公式如下：
P(t) = P0 EXP (-t /τ)
式中P(t)：擬合指數函數
P0：強度取值
EXP：指數運算符
t：時(shí)間取值
τ：熒光平均時(shí)間壽命