分子熒光分光光度計由光源發(fā)出的紫外光和藍紫光經(jīng)單色器處理后特定波長(cháng)的光照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)而發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過(guò)濾過(guò)和反射后，光信號被光電倍增管放大后，然后以圖或數字的形式在控制軟件上顯示出來(lái)。不同物質(zhì)由于分子結構的不同，其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征，各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜，因此可以用熒光化合物的該特征來(lái)進(jìn)行物質(zhì)的定性鑒定。
分子熒光分光光度計的熒光測試注意事項：
?、贅悠窇⒃谒拿嫱腹獾氖⒈壬笾?，如果是揮發(fā)性樣品應使用帶塞的熒光池。
?、谠跓晒夥治鰰r(shí)，為了得到穩定可靠的數據，一般需要開(kāi)機預熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈，預熱時(shí)間可以縮短到10min左右。對某些易感光、易分解的熒光物質(zhì)，盡量采用長(cháng)波長(cháng)、低人射光強度及短時(shí)間光照。
?、蹨囟茸兓梢馃晒鈴姸鹊母淖?。通常降低溫度，有利于提高熒光量子產(chǎn)率，熒光強度增大。溫度影響熒光強度的顯著(zhù)程度因樣品而異，大部分熒光物質(zhì)的熒光強度受溫度影響不大，測試溫度變化不超過(guò)±3℃，對測試結果幾乎無(wú)影響。
?、墚敓晒馕镔|(zhì)是弱酸或弱堿時(shí)，溶液的pH對熒光強度有較大影響。因為弱酸或弱堿在不同酸度中，分子和離子的電離平衡會(huì )發(fā)生改變，而熒光物質(zhì)的熒光強度會(huì )因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。
?、莘肿咏Y構中存在π-π共軛的熒光物質(zhì)在極性溶劑中，熒光效率顯著(zhù)增強。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著(zhù)提高熒光強度。
?、奕鹄⑸浜屠⑸涫侨軇┑膬煞N散射光，應注意不要誤把瑞利散射和拉曼散射光譜當做熒光光譜。瑞利散射光波長(cháng)與激發(fā)光波長(cháng)相同，拉曼散射與激發(fā)光波長(cháng)不同，而熒光物質(zhì)的熒光波長(cháng)與激發(fā)光波長(cháng)無(wú)關(guān)，因此可以通過(guò)選擇適當的激發(fā)波長(cháng)將拉曼散射光與熒光分開(kāi)。在測試時(shí)選擇合適的狹縫寬度，或者空白扣除，也可以對散射光的影響進(jìn)行校正。
?、邿晒馕镔|(zhì)分子與溶液中其它物質(zhì)分子之間作用導致熒光強度降低，常見(jiàn)的熒光猝滅劑，如鹵素離子、重金屬離子、硝基化物質(zhì)、重氮化合物等。溶液中的溶解氧也能引起幾乎所有的熒光物質(zhì)產(chǎn)生不同程度的熒光熄滅現象，因此，在較嚴格的熒光實(shí)驗中須除02。
?、鄿y試過(guò)程中注意不要肉眼盯著(zhù)氙燈光源看，以防對眼睛造成損傷。
?、醿x器房應注意經(jīng)常通風(fēng)，避免產(chǎn)生的臭氧在室內富集。
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